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基于神经生长因子探讨温经活血汤治疗寒凝血瘀证原发性痛经的作用机制

2022.07.24
来源部门: 作者: 系统
基于神经生长因子探讨温经活血汤治疗寒凝血瘀证原发性痛经的 作用机制

王丹丹 1 ,王东梅 2 ,张英杰 1 ,翟凤婷 1 ,蔡平平 3 ,马青 2 (1. 山东中医药大学, 山东 济南 250355; 2.  山东 中医药大学附属医院, 山东 济南 250014; 3. 山东第一医科大学附属省立医院, 山东 济南 250021)
摘要: 目的  基于神经生长因子(nerve growth factor ,NGF)及酪氨酸激酶受体 A(TrkA)、p75 营养因子受 体(p75NTR)揭示原发性痛经(primary dysmenorrhea ,PD)的发病机理,探讨温经活血汤治疗原发性痛经的作用 机制。方法  将 48 只 SPF 级雌性 Wistar 大鼠随机分为正常组(8 只)和模型复制组(40 只)。采用寒冷刺激联合 苯甲酸雌二醇和缩宫素复制寒凝血瘀证痛经模型 ,模型复制成功后将大鼠随机分为模型组、西药布洛芬 组(0.06 g ·kg- 1)和温经活血汤低、中、高剂量组(6.55、13.09、26.18 g ·kg- 1),每组各 8 只。 自模型复制第 7 天 起所有大鼠分别给予温经活血汤、布洛芬和蒸馏水灌胃处理,每天 1 次,连续 6 d 。观察大鼠注射缩宫素后的 扭体潜伏时间和 30 min 内扭体次数。提取大鼠子宫组织,蛋白质免疫印迹(Western Blot)法检测大鼠子宫组织 中 NGF、TrkA 和 p75NTR 的蛋白水平; 实时荧光定量 PCR(Real-time PCR)法检测大鼠子宫组织中 NGF、TrkA 和 p75NTR 的 mRNA 表达。结果  与正常组比较,模型组 NGF、TrkA、p75NTR 蛋白水平及 mRNA 表达均明 显升高(P < 0.01)。与模型组比较 ,各治疗组大鼠扭体潜伏时间均有所延长 ,但差异无统计学意义(P > 0.05),扭体次数明显减少(P < 0.01),NGF、TrkA、p75NTR 蛋白水平及 NGF、TrkA mRNA 表达均明显降 低(P < 0.01),西药布洛芬组和温经活血汤中、高剂量组 p75NTR mRNA 表达降低(P < 0.01)。结论  温经活 血汤治疗寒凝血瘀证原发性痛经的作用机制可能与其下调 NGF、TrkA、p75NTR 的表达有关。
关键词: 原发性痛经; 温经活血汤; 寒凝血瘀证; 神经生长因子(NGF);酪氨酸激酶受体 A(TrkA);p75 营养 因子受体(p75NTR); 大鼠
中图分类号: R285.5       文献标志码: A       文章编号: 1003-9783(2021)10- 1468-06
doi :10.19378/j.issn.1003-9783.2021.10.008

Explore  the  Mechanisms  of  Wenjing  Huoxue  Decoction  in  the  Treatment  of  Primary  Dysmenorrhea with Cold Coagulation and Blood Stasis Syndrome Based on Nerve Growth Factor
WANG Dandan1, WANG Dongmei2, ZHANG Yingjie1, ZHAI Fengting1, CAI Pingping3, MA Qing2 (1. Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355 Shandong, China; 2. Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250014 Shandong, China; 3. Provincial Hospital Affiliated to Shandong First Medical University, Jinan 250021 Shandong, China)
Abstract:Objective  To reveal the pathogenesis of primary dysmenorrhea(PD)based on nerve growth factor(NGF) and tyrosine kinase receptor A(TrkA), p75 neurotrophin receptor(p75NTR)and explore the mechanisms of Wenjing  Huoxue decoction in the treatment of PD. Methods  A total of 48 SPF female Wistar rats were randomly divided into  normal group(8 rats)and model group(40 rats). Dysmenorrhea rat model with cold coagulation and stasis syndrome  was established by cold stimulation combined with estradiol benzoate and oxytocin. After successful modeling, rats  were randomly divided into model group, western medicine group(ibuprofen, 0.06 g ·kg- 1), TCM low dose group,

 
收稿日期: 2021-04- 14
作者简介: 王丹丹, 女, 讲师, 博士, 研究方向:  中医药在原发性痛经中的应用 。 Email: wdd0304[at]163[dot]com 。通信作者:  王东梅, 女, 主任
医师, 研究方向: 女性生殖内分泌。Email: 979716798[at]qq[dot]com。
基金项目:山东省自然科学基金项目(ZR2019MH083); 山东省中医药科技项目(2020Q005)。


middle dose group and high dose group(Wenjing Huoxue decoction, 6.55, 13.09, 26.18 g ·kg- 1). There were eight rats in each group. All rats were  treated with Wenjing Huoxue decoction, ibuprofen and distilled water respectively once a day at the 7th day of modeling, and for 6 days consecutively. We observed the time of writhing latency and writhing times of rats within 30 minutes after oxytocin injection. The proteins of rat uterus were extracted to detect the levels of NGF, TrkA and p75NTR by Western Blot. mRNA expression of NGF, TrkA and p75NTR was also examined by Real- time PCR. Results  The protein level and mRNA expression of NGF, TrkA and p75NTR were significantly increased in the model group compared with the normal group(P < 0.01). Compared with the model group, the  time  of writhing  latency  of rats  in  each  treatment  group  was  extended, but  the  difference  was  not statistically significant(P > 0.05). The writhing times of rats were reduced significantly(P < 0.01). The protein levels of NGF, TrkA, p75NTR and the mRNA expressions of NGF and TrkA were reduced significantly(P < 0.01), and the mRNA expressions of p75NTR in the western medicine group, medium- and high- dose of Chinese medicine group  were  reduced  significantly(P  <  0.01).  Conclusion  The  mechanism  of  Wenjing  Huoxue  decoction  in  the treatment of PD with cold coagulation and blood stasis may be related to the down- regulation of NGF, TrkA and p75NTR.
Keywords: Primary  dysmenorrhea; Wenjing  Huoxue  decoction; cold  coagulation  and  stasis  syndromes; nerve growth factor; tyrosine kinase receptor A; p75 neurotrophin receptor; rats






原发性痛经(primary dysmenorrhea, PD)是指伴  随月经周期出现下腹部疼痛而无生殖器官器质性病  变者, 是妇科最常见的疼痛性疾病, 占痛经的 90%  以上[1] 。 临床可伴恶心 、 呕吐 、腹泻、腰酸等症状, 甚者可见晕厥, 给患者的工作 、生活和学习带来不  同程度的困扰, 同时也对社会经济的发展造成严重  影响。据统计, 原发性痛经的发病率为 50%~90%[2], 其中约 50%的患者疼痛程度为中度至重度[3] 。 在一  项针对 18 岁以上的原发性痛经患者人群调查中, 超过一半的受访者表示原发性痛经在一定程度上限  制了其正常的生活活动, 17%的患者表示因此缺课 或误工[4] 。
原发性痛经的确切发病机制目前尚未完全明  确, 多 数学者认为与经期 子 宫 内膜 前 列 腺 素 F2α    (prostaglandin F2α, PGF2α)释放异常增多, 导致子宫 平滑肌过度痉挛收缩, 子宫缺血缺氧有关[5] 。原发性  痛经的一线治疗药物为非甾体类抗炎药(nonsteroidal  anti-inflammatory drugs, NSAIDs), 但仍有 18%的患  者是无效的[6], 且恶心 、 呕吐等胃肠道反应明显[7]。 此外, 有研究[8]表明 NSAIDs 会增加患者心血管疾病  的风险 。 因此, 进一步揭示原发性痛经的发病机  制, 探寻安全有效的治疗方法具有重要意义。
神经生长因子(nerve growth factor, NGF)为神经
力的酪氨酸激酶受体 A(tropomyosin-receptor kinase, TrkA)和低亲和力的 p75 营养因子受体(p75 neurotrophin  receptor, p75NTR)结合发挥相关生理功能[9] 。 目前关 于 NGF 的研究多与神经系统疾病、炎症反应、情感  障碍以及某些疼痛性疾病有关[10- 13] 。 国内外仅有少量  研究[14- 15]初步表明, NGF 可能与原发性痛经的发生存  在一定关系, 但尚需要更多的研究予以证实。
由于临床寒凝血瘀证原发性痛经最为多见, 我们 以王清任的 “少腹逐瘀汤”为基础, 加重温经活血  药的分量, 组成了具有温经化瘀止痛作用的温经活  血汤, 临床疗效明显[16] 。为进一步探索原发性痛经的  发病机制及温经活血汤治疗原发性痛经的作用靶 点, 本研究采用寒冷刺激联合苯甲酸雌二醇和缩宫 素复制寒凝血瘀证痛经模型, 观察温经活血汤对痛  经大鼠扭体反应的抑制作用 。 同时, 对比分析痛经 模 型 大 鼠 与 正 常 大 鼠 子 宫 组 织 中 NGF 、 TrkA、 p75NTR 蛋白及 mRNA 的表达差异及温经活血汤对其  表达的影响。
1 材料与方法
1.1  动物  SPF 级性成熟雌性 Wistar 大鼠 48 只, 未  交配, 7~8 周龄, 体质量(200±20)g, 购自济南朋悦 实 验 动 物 繁 育 有 限 公 司, 动 物 质 量 合 格 证 号:


营养因子家族的重要成员之一主要通过与高亲和 370726200100423846动物生产许可证号: SCXK(鲁)


 


20140007 。 实验大鼠饲养于山东中医药大学附属医 院实验室动物中心 。饲养条件:  室温 23 ℃~25 ℃, 相对湿度 50% ~60%, 日光灯光照, 明暗 12 h 交  替, 自由摄食 、饮水 。实验方案已通过山东中医药 大学附属医院动物伦理委员会审核(伦理批件号: AWE-2019-011)。
1.2 药物及试剂  醋香附(批号: 18021421)、醋延胡  索(批号: 18121841)、 肉桂(批号: 18100681)、干  姜(批号: 18016762)、盐小茴香(批号: 18092211)、 川芎(批号: 18017941)、 当归(批号: 18110381)、 白芍(批号: 18015361)、煨肉豆蔻(批号: 18070401)、 生蒲黄(批号: 19092481)、制没药(批号: 18023641)、 赤芍(批号; 18030511)、 陈皮(批号: 18018141)、 生甘草(批号; 1901050), 均由山东中医药大学附属 医院中药房提供; 布洛芬缓释胶囊(规格:  每粒  0.3 g),中美天津史克制药有限公司生产, 批号: 18110645;苯甲酸雌二醇注射液(规格:  2 mL∶4 mg), 宁波第二激素厂生产, 批号: 181214; 缩宫素注射  液(规格:  1 mL∶5 IU), 马鞍山丰原制药有限公司生  产, 批号: 180912- 1。RIPA 裂解液(批号: G2002)、 β-actin(批号: GB12001)、HRP 标记山羊抗兔(批号: GB23303)、RNA 提取液(批号: G3013), 均购自武汉 赛维尔生物科技有限公司;  Rabbit Anti-NGF(批号: ab52918)、 Rabbit  Anti- TrkA(批 号: ab76291)、 Rabbit Anti-p75NTR(批号: ab52987), 均购自北京  博 奥森 生 物 技 术有 限 公 司; 蛋 白 Maker(批 号: 26616)、 RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit  (批号: K1622), 均购自美国 Therm 公司。
1.3  仪器  SW-CJ-1F 型超净工作台, 苏州安泰空气 技术有限公司;  D3024R 型台式高速冷冻型微量离心 机, 大龙兴创实验仪器(北京)有限公司;  TSY-B 型 脱色摇床, 武汉赛维尔生物科技有限公司;  V300 型 扫描仪, 日本 EPSON 公司;  alphaEaseFC 灰度分析 软件, 美国 Alpha Innotech 公司; Stepone plus 型荧 光定量 PCR 仪, 美国 ABI 公司;  T-Gradient 型梯度 PCR 扩增仪, 德国 Biometra 公司;  220 凝胶成像系 统, 美国 Alpha 公司;  EC250- 90 型电泳仪, 美国 Thermo 公司。
1.4  模型复制 、分组及给药  所有大鼠适应性饲养
1 周后, 按随机数字表法随机分为正常组和寒凝血瘀 证痛经模型复制组。模型复制成功后将寒凝血瘀证

经活血汤低 、 中 、高剂量组, 每组各 8 只, 分别用 苦味酸标记。
采用寒冷刺激联合苯甲酸雌二醇以及缩宫素建立  寒凝血瘀证痛经大鼠模型[17- 18] 。将大鼠每天固定时间 置于冰块上 20 min, 每天 1 次, 连续 12 d; 同时, 每天给予每只大鼠皮下注射苯甲酸雌二醇注射液  0.4 mg, 而第 1 天和第 12 天每只各 0.8 mg, 末次注  射苯甲酸雌二醇 1 h 后腹腔注射缩宫素每只 2 IU 。 以  大鼠所表现的症状作为寒凝血瘀证模型复制成功的  指标: 大鼠寒战明显, 喜扎堆, 呼吸弱, 弓背竖 毛, 蜷缩少动, 爪尾部紫暗, 耳色暗红, 毛色枯  槁, 舌质紫暗, 舌下脉络增粗增长, 粪质不成形。 以扭体反应作为痛经模型复制成功的指标: 大鼠腹  部收缩内凹, 躯干与后肢伸展, 臀部与一侧肢体  内旋。
所有大鼠均自模型复制第 7 天起给予相应灌胃处
理, 其中西药布洛芬组和温经活血汤各组分别按体 表面积折算为成人的等效剂量给药[19] 。 温经活血汤 低 、 中 、高剂量组分别按 6.55、 13.09、26.18 g ·kg- 1 给予温经活血汤水冲剂灌胃 2 mL; 西药布洛芬组按 0.06 g · kg- 1  给予布洛芬缓释胶囊灌胃 2 mL; 正常 组、模型组相同时间给予蒸馏水灌胃 2 mL, 每天 1 次, 连续 6 d 。实验过程中, 温经活血汤低、 中剂 量组大鼠各死亡 1 只。
1.5  扭体反应评价  从注射缩宫素开始计时, 观察除 正常组外所有大鼠扭体反应潜伏时间及 30 min 内扭 体 次 数 。 记 录完 毕后, 腹 腔 注 射 10% 水 合 氯醛
3.5 mL ·kg- 1 麻醉, 取大鼠子宫组织后, 脱颈处死。 PBS 缓冲液冲洗掉子宫组织多余的血液, 分装于无菌  EP 管中, -80 ℃冰箱冷冻保存。
1.6  蛋白免疫印迹(Western  Blot)法检测子宫组织 NGF 、TrkA 、p75NTR 蛋白表达  取大鼠子宫组织 约 30 mg, 剪成小块置于 1.5 mL EP 管中, 用预冷的 1 × PBS 洗 涤 2 次, 加 入 300  μL  RIPA 和 3  μL PFMS, 在液氮中充分研磨组织至匀浆状态, 冰浴
30 min, 于 4 ℃ 、 12 000 r ·min- 1(离心半径 8 cm)离  心 20 min, 取上清。BCA 法测定蛋白浓度, 沸水浴  变性 15 min, SDS-PAGE 电泳, 转膜, 封闭, 一抗  4 ℃ 孵育过夜, 二抗慢摇孵育 1 h, ECL 中显影 。 Alpha 软件处理系统分析目标带的光密度值。
1.7  实 时荧光 定量 PCR(Real- time  PCR)法检测


痛经模型大鼠随机分为模型组、西药布洛芬组及温 NGF、 TrkA、 p75NTR mRNA 表达水平取 50 mg


 


子宫组织剪成小块, 置于研钵中, 加入 1 mL Trizol  Reagent 在液氮中充分研磨, 冰上裂解 10 min; 于  4  ℃ 、 12 000 r ·min- 1(离心半径 8 cm)离心 10 min, 取 上清 。 加入与上清等体积的异丙醇;  于 4 ℃ 、 12 000 r ·min- 1(离心半径 8 cm)离心 10 min, 弃上清, 75%乙醇洗涤沉淀;  用无 RNA 酶的水溶解 RNA, 55 ℃ 孵 育 5 min 。 Nanodrop 2000 检测 RNA 浓度。 逆转录为 cDNA, 引物由武汉赛维尔生物科技有限公  司合成, 95 ℃预变性 2 min, 95 ℃变性 15 s, 60 ℃  退火, 30 s, 72 ℃延伸 30 s, 40 个循环。 引物由武  汉赛维尔生物科技有限公司公司合成, 序列见表 1。
表 1   引物序列
Table 1   Primer sequences

引物名称方向引物序列
NGF正向(5’-3’)5’-CATCACTGTGGACCCCAAACTGT-3’

TrkA

p75NTR

β-actin反向(3’-5’) 正向(5’-3’) 反向(3’-5’) 正向(5’-3’) 反向(3’-5’) 正向(5’-3’) 反向(3’-5’)5’-GTCCGTGGCTGTGGTCTTATCTC-3’  5’-TTCCTTTCTGCCCTCCTCCTA-3’        5’-TCCCACTTGAGAATGATGTCCTG-3’  5’-ATTCCTGTCTATTGCTCCATCTTG-3’ 5’-TGCGTATGGGTCTGCTGGTC-3’        5’-TGCTATGTTGCCCTAGACTTCG-3’
5’-GTTGGCATAGAGGTCTTTACGG-3’

1.8  统计学处理方法  应用 SPSS 25.0 统计软件进行 数据处理, 统计资料以均数 ± 标准差(x ± s)表示, 若 数据满足正态性和方差齐性, 组间比较采用单因素 方差分析, 否则, 组间比较采用秩和检验。P<0.05 为差异有统计学意义。

2  结果
2.1  温经活血汤对大鼠扭体潜伏时间 、扭体次数的 影响  见表 2 。与模型组比较, 各治疗组扭体潜伏时 间均有所延长, 但差异无统计学意义(P>0.05)。与
表 2   温经活血汤对大鼠扭体潜伏时间、 扭体次数的影响(x ± s, n=7~8)
Table  2    Effect  of  Wenjing  Huoxue  decoction  on  the  time  of writhing latency and writhing times of rats(x ± s, n=7~8)

组别剂量/(g ·kg-1)扭体潜伏时间/min扭体次数/次
正常组
模型组
布洛芬组
温经活血汤低剂量组 温经活血汤中剂量组 温经活血汤高剂量组-
-
0.06
6.55
13.09
26.18-
6.25 ± 0.71
7.25 ± 1.04
6.43 ± 1.40
6.86 ± 1.35
6.75 ± 0.71-
19.75 ± 2.49
11.88 ± 1.81##
15.29 ± 2.14##
12.29 ± 1.80##
13.13 ± 1.73##

注: 与模型组比较,##P < 0.01
模型组比较, 各治疗组扭体次数均明显减少, 差异 有统计学意义(P<0.01)。结果表明, 温经活血汤能 有效抑制寒凝血瘀证原发性痛经模型大鼠的扭体 反应。
2.2  温经活血汤对大 鼠子宫组织 中 NGF 、TrkA、 p75NTR 蛋白表达的影响  见图 1、表 3 。与正常组 比较, 模型组 NGF 、TrkA 、p75NTR 蛋白表达水平均  明显升高, 差异有统计学意义(P < 0.01); 与模型组 比较, 各治疗组 NGF 、TrkA 、p75NTR 水平均明显降  低, 差异有统计学意义(P < 0.01)。结果表明, 温经 活血汤能有效降低寒凝血瘀证原发性痛经模型大鼠  子宫组织中的 NGF 、TrkA 、p75NTR 蛋白表达。
NGF                                                                            27 kDa


TrkA                                                                            87 kDa


p75NTR                                                                            45 kDa


β-actin                                                                            42 kDa

A          B          C          D          E          F
注: A. 正常组; B. 模型组; C. 布洛芬组; D. 温经活血汤低剂量组; E. 温经活血汤中剂量组; F. 温经活血汤高剂量组
图 1   各组大鼠子宫组织中 NGF、TrkA、p75NTR 蛋白表达 条带图
Figure  1     Comparison  of  NGF 、 TrkA  and  p75NTR  protein expression in the uterus of rats in each group
表 3   温经活血汤对大鼠子宫组织中 NGF、TrkA、p75NTR 蛋白表达的影响(x ± s, n=3)
Table  3    Effect of Wenjing Huoxue decoction on expression of NGF, TrkA and p75NTR in the uterus of rats(x ± s, n=3)

组别剂量/(g ·kg-1)NGFTrkAp75NTR
正常组
模型组
布洛芬组-
-
0.060.29 ± 0.02
** 0.81 ± 0.06
0.40 ± 0.02##0.32 ± 0.04
**
0.78 ± 0.04
0.44 ± 0.02##
温经活血汤低剂量组 温经活血汤中剂量组 温经活血汤高剂量组6.55
13.09
26.180.62 ± 0.05## 0.48 ± 0.09## 0.44 ± 0.01##0.56 ± 0.01##
0.50 ± 0.02##
0.45 ± 0.02##

注: 与正常组比较, **P < 0.01; 与模型组比较, ##P < 0.01
2.3  温经活血汤对大 鼠子宫组织 中 NGF 、TrkA、 p75NTR  mRNA 表达的影响  见表 4 。 与正常组比
较, 模型组 NGF 、TrkA 、p75NTR mRNA 表达均明显 升高, 差异有统计学意义(P<0.01)与模型组比


 


较, 各治疗组 NGF 、TrkA mRNA 表达明显降低, 差  异有统计学意义(P < 0.01); 布洛芬组和温经活血汤 中、高剂量组 p75NTR mRNA 表达降低, 差异有统计 学意义(P < 0.01)。结果表明, 温经活血汤能有效降  低 寒 凝 血 瘀 证原 发性 痛 经模 型 大 鼠 NGF 、 TrkA、 p75NTR mRNA 表达。
表 4   温经活血汤对大鼠子宫组织中 NGF、TrkA、p75NTR mRNA 表达的影响(x ± s, n=3)
Table   4     Effect   of   Wenjing   Huoxue   decoction   on   mRNA  expression of NGF, TrkA and p75NTR in the uterus of rats(x ± s, n=3)

组别剂量/    (g ·kg-1)NGFTrkAp75NTR
正常组
模型组
布洛芬组
温经活血汤低剂量组 温经活血汤中剂量组 温经活血汤高剂量组1.00
3.62 ± 0.04
1.80 ± 0.06##
2.64 ± 0.54##
1.88 ± 0.03##
2.07 ± 0.35##1.00
2.04 ± 0.21
1.35 ± 0.04##
1.52 ± 0.14##
1.36 ± 0.11##
1.44 ± 0.14##1.00
3.18 ± 0.09
1.88 ± 0.06##
2.97 ± 0.17
1.94 ± 0.17##
2.18 ± 0.55##

注: 与正常组比较, **P < 0.01; 与模型组比较, ##P < 0.01

3 讨论
原发性痛经病位在子宫, 变化在气血, 主要病机  为 “不通则痛”和 “不荣则痛”, 临床以 “不通则 痛”的实证较为多见。临床流调学研究[20]表明, 原发 性痛经患者以瘀血体质为主, 临床证型以寒凝血瘀  证为主。程芳等[21]对 606 例原发性痛经患者的证型分  布进行统计分析, 结果显示寒凝血瘀证患者比例最  高 。可见, 寒凝血瘀是原发性痛经的主要病机 。本  研究的温经活血汤中肉桂补火助阳, 温经散寒, 醋  延胡索行气止痛, 共为君药; 盐小茴香散寒止痛, 醋香附 、 当归、川芎 、 白芍行气活血止痛, 共为臣  药。赤芍 、生蒲黄、醋没药、干姜 、煨肉豆蔻、 陈 皮温经散寒, 化瘀止痛, 共为佐药。生甘草调和诸 药, 缓急止痛, 为使药 。 诸药合用, 共奏温经活  血, 化瘀止痛之效。
生理状态下, 神经生长因子(NGF)在人类子宫肌 层、子宫肌层-子宫内膜交界面、子宫内膜基底层均 有神经纤维支配, 但这些神经纤维对子宫肌层和内 膜基底层的具体作用机制尚不清楚[22] 。作为一种疼痛 介质, NGF 一方面能够调控与中枢疼痛传导有关的 P 物质以及降钙素等的表达, 另一方面 NGF 能够增加 神经元的数量和密度[23] 。Hirata 等[24]对 11 348 名日本
 
女性志愿者与 22 种妇科相关的表型变量进行了全基  因组关联分析, 确定了包括痛经严重程度在内的多  种疾病和性状相关的核苷酸变异, 其中包括 NGF 附  近存在痛经单核苷酸位点变异, 这种变异与 NGF 公  认 的 lncRNA 增 强 子(RP4- 663N10.1)表 达 相 关 。 Maranesi 等[14]研究发现 NGF 可以通过上调一氧化氮 合成酶和前列腺素 E2-9-酮还原酶活性, 增加 PGF2α    的合成与分泌。此外, 有研究[15,25]证明 NGF 基因位点  附近的基因多态性与原发性痛经的发生风险及疼痛  程度有密切关系 。 以上研究均提示 NGF 在原发性痛  经的发生 、发展及疼痛的严重程度方面具有重要意  义, 可能成为治疗原发性痛经的有效靶点。
综上所述, NGF 及其受体异常表达与原发性痛 经的发生具有密切关系 。本研究结果显示, 寒凝血 瘀 证 痛 经 模 型 大 鼠 子 宫 组 织 中 NGF 、 TrkA 和 p75NTR 蛋白含量及 mRNA 表达水平明显升高, 温经 活血汤能有效抑制寒凝血瘀证痛经模型大鼠扭体反 应, 降低大鼠子宫组织中 NGF 、TrkA 和 p75NTR 表 达, 表明 NGF 及其受体异常表达可能是原发性痛经 的发病机制之一, 温经活血汤可能通过下调 NGF 及 其受体表达发挥治疗原发性痛经的作用, 其具体作 用途径尚需进一步研究。

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(编辑: 修春)

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